Методы изучения мембранных белков..

ВВЕДЕНИЕ

Цель работы: ознакомление с методами изучения мембранных белков.
Поставленная цель раскрывается через следующие задачи:
исследовать структуру мембранных белков;
рассмотреть методы их выделения и очистки;
методы исследования характеристик мембранных белков.
Известно, что более трети структурной части генома кодирует мембранные белки, однако среди известных пространственных структур лишь менее половины процента принадлежит белкам этого класса.
При этом их роль в организме трудно переоценить. Большое количеств функционально значимых белков являются мембранными: рецепторы, каналы, различные ферменты и пр. Кроме того, многие из них являются мишенями для лекарственных препаратов: более 70% существующих лекарственных средств действуют именно на мембранные белки. Таким образом, изучение механизмов функционирования мембранных белков необходимо, а одним из первых шагов к пониманию механизма является получение пространственной структуры.

ВВЕДЕНИЕ 2
1. СТРУКТУРА МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ 3
2. ВЫДЕЛЕНИЕ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ. 6
2.1 СОЛЮБИЛИЗАЦИЯ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ 7
2.1.1 ПЕРИФЕРИЧЕСКИЕ БЕЛКИ 7
3. ХАРАКТЕРИСТИКА ОЧИЩЕННЫХ ИНТЕГРАЛЬНЫХ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ 10
3.1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ СУБЪЕДИНИЦ (ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ) 10
3.2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ НАТИВНОГО БЕЛКА С ПОМОЩЬЮ ГИДРОДИНАМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ 11
3.3 МЕТОД РАДИАЦИОННОЙ ИНАКТИВАЦИИ 12
3.4 СПЕКТРАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ 13
3.4.1 МЕТОД КРУГОВОГО ДИХРОИЗМА 14
3.4.2 ИНФРАКРАСНАЯ СПЕКТРОСКОПИЯ И СПЕКТРОСКОПИЯ КОМБИНАЦИОННОГО РАССЕЯНИЯ 15
3.4.3 ЯМР-СПЕКТРОСКОПИЯ 16
3.5 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ 16
3.6 ИЗУЧЕНИЕ СТЕХИОМЕТРИИ СУБЪЕДИНИЦ 17
3.7 ИЗУЧЕНИЕ ТРЕХМЕРНОЙ СТРУКТУРЫ С ПОМОЩЬЮ РЕНТГЕНОВСКОЙ ДИФРАКЦИИ И РЕКОНСТРУКЦИИ ИЗОБРАЖЕНИЯ 18
3.7.1 КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ 18
3.7.2 РЕКОНСТРУКЦИЯ ИЗОБРАЖЕНИЯ И ДВУМЕРНЫЕ КРИСТАЛЛЫ 20
4. ПРИМЕР СТРУКТУРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ. 21
4.1 СТРУКТУРА ПОРИНОВ 21
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 24
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 25

1. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции: Пер. с англ. М.: Мир, 1997,-624с.
2. Финдель Дж. Б., Эванз У.Г. Биологические мембраны. Методы: Пер. с англ. М.: Мир, 1990, - 424с.
3. Фаллер Дж. М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. Руководство для врачей: пер. с англ. М.: Бином - Пресс, 2004,-272с.
4. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия Москва, Просвещение 1987.
5. Лефковитс И., Пернис Б. Иммунологические методы исследований(3 том) Пер. с англ. М.: Мир, 1988,-530с.
6. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. Москва, "Медицина", 1998 год,-704с.
7. Сим Э. Биохимия мембран: Пер. с англ. М.: Мир, 1985,-110с.